乙醯化是一種重要的翻譯後修飾,影響蛋白質的功能和定位。以下是幾種常用的乙醯化方法:
酶聯免疫吸附法(ELISA)。通過特異性抗體捕獲目標蛋白,然後使用酶標記的二抗檢測,間接估計目標蛋白的乙醯化濃度。
免疫印跡法(Western Blot)。通過SDS-PAGE電泳分離蛋白質,然後轉移到膜上,使用特異性抗體檢測乙醯化蛋白。
質譜分析。包括蛋白質提取和純化,酶切或化學裂解為肽段,利用液相色譜分離,最後通過質譜檢測和分析乙醯化肽段。
高效液相色譜(HPLC)。通過分離和檢測蛋白質水解產物中的乙醯化胺基酸,定量蛋白乙醯化水平。
染色質免疫沉澱(ChIP)。通過使用特異性的抗體沉澱與乙醯化修飾相關的染色質複合物,分析沉澱下來的DNA或蛋白質,了解乙醯化修飾的靶基因和與其他蛋白質的相互作用。
這些方法各有優缺點,適用於不同研究需求和條件。