同聚物加尾法是一種分子生物學技術,主要用於DNA的連線過程中,具體操作如下:
利用末端轉移酶在DNA(無論是載體還是外源雙鏈DNA)的3'端加上一段寡聚核苷酸,從而創造出人工的黏性末端。
外源DNA和載體DNA分子分別加上不同的寡聚核苷酸,例如dA(dG)和dT(dC),然後在DNA連線酶的作用下連線起來,形成重組的DNA。
此方法的核心在於末端轉移酶的能力,該酶可以將核苷酸添加到DNA分子的3'-OH末端,從而形成特定的序列。這種方法有幾個顯著的優點:
由於同一種DNA兩端添加的序列是互補的,因此不易自身環化,這增加了連線的特異性。
載體和外源片段的末端是互補的黏性末端,從而提高了連線效率。
此方法適用於任何方法製備的DNA連線。
然而,這種方法也有一些不便之處:
操作過程較為繁瑣。
外源片段的回收較為困難。
添加的同聚物序列可能會影響外源基因的表達。
此外,值得注意的是,同聚物加尾法在重組連線後可能會產生某些限制性內切核酸酶的切點。