使用手套箱時，需要注意以下幾點：
日常維護與保養。在每次工作前後，應對手套箱內外表面、觀察系統和工作檯面進行清潔，確保無雜物。記錄手套箱的水和氧含量以及設備耗氣量，以避免氣體壓力不足導致設備停止運行。定期檢查手套箱的真空泵油麵，不足三分之二時需添加，每半年更換一次真空泵油。每周檢查真空泵油麵，不足三分之二時要注意添加，每半年更換一次真空泵油。
手套的使用。使用設備時，禁止佩戴可能刺破手套的物品，如手錶、戒指等。若使用尖銳物品，需格外小心以免刺破手套。從手套箱內取出樣品前，需先抽出過渡艙內的空氣，然後更換為乾燥潔淨的氣體。放置樣品時，小心不要用手觸摸過渡艙內壁，並佩戴手套。
過渡艙的維護。檢查過渡艙密封圈是否破損，破損時應立即更換。如果過渡艙門難以打開或關閉，可能是機械問題，需諮詢專業人員。若密封條問題，可嘗試少塗些油脂或潤滑油。
清洗手套箱。清洗手套箱時，應調節減壓閥門保持箱體壓力大於0.5mbar，以防空氣倒流。若鋼瓶內氣體用盡，更換氣瓶時必須先關閉觸控螢幕上的清洗開關，並確認減壓閥副表在關閉狀態。清洗超出正常時間或用氣量，水氧值仍不達標時，應重新檢漏或聯繫售後工程師。
停電後的重啟。若手套箱因停電停止運行，通電後需按面板上的「真空泵」按鈕使真空泵運轉。
遵循這些注意事項有助於確保手套箱的安全、有效運行。