使用暗視野聚光鏡的方法主要包括以下步驟：
將暗視野聚光鏡安裝在顯微鏡上。
在聚光器和標本片之間加一滴香柏油，以防止照明光線在聚光鏡上全反射，從而得到暗視野照明。
使用低倍物鏡（如4X物鏡）觀察，通過調節聚光鏡的升降螺旋和調中螺絲進行粗調和精調，使聚光鏡的集光束會聚在標本上，並處於視場中心，即聚光鏡的光軸與物鏡光軸相重合。
根據需要更換不同放大率的物鏡，並慢慢進行聚光鏡的上下調節和中心調節，直至整個視場的反差達到最佳值。
使用強的光源照明，但需防止直射光線進入物鏡。
調節焦距，找到所需觀察的物像。
此外，使用暗視野聚光鏡時需要注意以下幾點：
載玻片不能太厚，要求小於1.1毫米。
標本片需要嚴格清潔，以避免光線在污點、灰塵或劃痕處產生衍射現象，破壞暗場效果。
如果浸液中含有雜質或氣泡，會引起光線的亂反射，影響暗場效果。
使用100X油浸物鏡時，物鏡中心需帶有可變孔徑光闌，觀察時減少數值孔徑使視場中呈現暗背景。