液相色譜方法摸索的最佳化涉及多個關鍵步驟，包括溶劑選擇、分離模式確定、方法開發目標設定、梯度條件最佳化、波長選擇、樣品穩定性測試、色譜柱對比等。以下是詳細介紹：
溶劑選擇。根據化合物的官能團和分子量選擇合適的溶劑，確保化合物能夠溶解。
分離模式確定。根據化合物的溶解性和分子量選擇合適的分離模式，如反相色譜，其中70%~80%的化合物可以使用反相色譜進行分離。
樣品穩定性測試。在無參考標準或標準方法無法直接套用時，需要進行樣品穩定性測試，包括在2mol/L酸或鹼、4500lx光照、90℃水浴等條件下的破壞程度測試，確保樣品在分析過程中保持穩定。
梯度條件最佳化。最佳化梯度條件，確保所有雜質成分都能被洗脫檢測，並具有良好的分離度。
波長選擇。在DAD檢測器下，選擇主成分的最大吸收或平台處的波長。
色譜柱對比。根據情況選擇合適的色譜柱。
此外，在最佳化過程中，還需要注意方法的耐用性、峰型、效率、重現性、經濟性等評價指標。最佳化完成後，應在同一天、同一人、使用同一台機器對所有樣品進行重複分析，以確保方法的可靠性和可比性。