真菌DNA提取方法通常包括以下步驟:
菌體處理。取一定量的真菌菌體,加入適量的溶液和玻璃珠,高速震盪使菌體充分破碎。有時會加入RNaseA以去除RNA,再加入蛋白酶K以降解蛋白質。
裂解和離心。在特定溫度下裂解一定時間,然後用高速離心機離心,收集上清液。
沉澱和洗滌DNA。向上清液中加入無水乙醇和/或有機溶劑(如氯仿),以沉澱DNA。然後進行離心,去除上清液,用70%乙醇洗滌DNA沉澱,以去除殘留的鹽和其他雜質。
溶解和純化DNA。將DNA沉澱物重新溶解於適量的TE緩衝液或其他溶劑中,有時會加入RNaseA以去除殘留的RNA,確保DNA的純度。
保存。將純化的DNA置於-20℃保存,以防止降解。
不同的研究可能會根據具體的實驗需求和菌種特性,對上述步驟進行調整和最佳化。