螢光檢測原理主要基於物質的螢光現象，即物質在吸收特定波長的光輻射後，分子從基態躍遷到激發態，當分子從激發態回到基態時，會以光輻射的形式釋放能量，即螢光。
螢光檢測過程涉及激發光源、樣品激發和螢光檢測三個主要部分。激發光源通常為強度較高且波長可調的光源，如氘燈、氙燈或雷射器。樣品中的分子在特定波長的光照射下被激發至激發態，然後觀察和分析這些分子回到基態時發出的螢光。螢光檢測器（如光電管、光電二極體或光電倍增管）負責將螢光信號轉化為電信號進行測量和分析。螢光的強度與樣品中特定成分的濃度相關，因此可以通過測量螢光強度進行定量分析。
螢光檢測技術廣泛套用於化學、生物和醫學領域，包括原子螢光檢測、螢光偏振檢測、酶標記抗原或抗體檢測等。