Edman降解法是一種用於測定蛋白質或多肽的N端胺基酸序列的技術。它是由瑞典化學家Pehr Victor Edman在1950年代發展的,至今仍被廣泛使用。該方法基於連續地從多肽的N端移除胺基酸並對其進行識別的原理。
Edman降解的主要步驟包括:
在鹼性條件下,多肽的N端與Edman試劑(苯異硫氰酸酯)反應,形成一個穩定的酮基硫代苯並酮(PTH)衍生物。
通過加熱或酸處理,使PTH衍生物與多肽斷裂,釋放出一個PTH-胺基酸衍生物和一個縮短了一個胺基酸的多肽。
使用高效液相色譜(HPLC)對PTH-胺基酸衍生物進行分析和鑑定,從而確定被切除的胺基酸。
這一過程可以連續進行,以獲得蛋白質的N端胺基酸序列。
Edman降解法的優點包括其特異性和準確性。它只針對N端的胺基酸進行操作,且在理想情況下,可以提供非常準確的測序結果。然而,該方法也有一些限制,例如適用於較短的多肽片段(通常不超過50-60個胺基酸),對於更長的多肽或蛋白質,需要先進行切割,然後再分別測序。此外,該方法對樣品的需求量較大。
儘管現代質譜技術在蛋白質和多肽測序中已經變得非常流行,Edman降解法仍然是一種有價值的工具,特別是當質譜方法不適用或需要驗證質譜結果時。