MTT法的原理主要基於活細胞和死細胞在代謝過程中的差異。具體來說:
活細胞的作用:活細胞的線粒體中含有琥珀酸脫氫酶,這種酶能夠將外源性的MTT(噻唑藍)還原為不溶於水的藍紫色結晶甲瓚(Formazan)。這種結晶會沉積在細胞中,而死細胞則沒有這種能力。
死細胞的作用:死細胞不會參與MTT的還原反應,因此不會形成甲瓚結晶。
溶解和檢測:二甲基亞碸(DMSO)能夠溶解細胞中的甲瓚結晶,使其顯色。隨後,通過酶標儀在490nm波長處測定其光吸收值,可以間接反映出活細胞的數量。在一定細胞數量範圍內,MTT結晶形成的量與細胞數成正比。
套用:MTT法常用於檢測細胞增殖、細胞活力以及細胞毒性。它包括生物活性分子的活性檢測、抗腫瘤藥物的篩選以及細胞增值和細胞活性的測定。
綜上所述,MTT法是一種基於活細胞和死細胞在代謝過程中對MTT反應的差異來檢測活細胞數量和細胞活力的方法。