MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽)的配製通常是將MTT粉末溶解在磷酸緩衝液(PBS)或無酚紅的培養基中,使其終濃度為5mg/ml。以下是詳細步驟:
稱取一定量的MTT粉末,例如0.5克,然後將其溶解在100ml的PBS或培養基中。
在溶解過程中,可以使用0.22μm的濾膜過濾溶液,以去除其中的細菌。
過濾後的MTT溶液應在4°C下避光保存,為了長期保存,可以將其分裝在避光袋或用黑紙、錫箔紙包裹的容器中,並存放在-20°C,需要注意的是,應避免反覆凍融,最好小劑量分裝使用。
在使用前,應確保MTT溶液的顏色為黃色,如果變為灰綠色,則表示MTT分解,不應再使用。
此外,在使用MTT進行實驗時,通常將MTT溶液加入到細胞培養板中,其在細胞培養中的最終濃度通常為0.5mg/ml(即500μg/ml),這可以通過稀釋母液來實現。在實驗結束後,通常使用二甲基亞碸(DMSO)來溶解MTT形成的甲瓚結晶,並使用酶聯免疫檢測儀在特定波長下測量吸光度值,以評估細胞的活性和數量。