分解酶的方法主要包括以下幾種:
離心分離。通過離心處理,可以將酶富集到特定的亞細胞結構中,如細胞核、線粒體或溶酶體。離心過程中,離心力越大,所需的時間越短。
差速離心和等密度梯度離心。這些離心技術可以分離不同密度的顆粒,適用於粗提或濃縮酶。
凝膠過濾。通過凝膠層析柱,根據分子大小分離酶蛋白。這種方法可以測定未知蛋白的分子量。
透析與超濾。透析用於去除酶液中的鹽類、有機溶劑、低分子量抑製劑等,而超濾可以濃縮酶液。
鹽析。使用硫酸銨等鹽類沉澱蛋白質,特別是酶。這種方法需要在最適宜的pH值和溫度下進行,以避免酶的失活。
有機溶劑沉澱。使用醇類等有機溶劑使蛋白質變性並沉澱酶。操作應在低溫下進行,以防止蛋白質變性。
聚合物絮凝劑沉澱。使用如葡聚糖和聚乙二醇等聚合物絮凝劑,它們可以與酶分子爭奪水分子,導致酶沉澱。聚乙二醇對蛋白質有保護作用,且不會吸附在離子交換樹脂上。
用金屬離子和絡合物沉澱。酶和其他蛋白質都可以形成金屬鹽,從而沉澱。但這種方法可能導致酶失活。
用特殊試劑沉澱法。例如,使用鏈黴素可以選擇性去除核酸,從而沉澱胞內酶。
這些方法可以根據特定酶的特性、所需的純度水平和實驗條件來選擇和套用。