包被原理主要涉及抗原或抗體與固相載體表面的結合過程,這一過程對於免疫測定和生物分析至關重要。以下是包被原理的詳細解釋:
定義:
包被是指將抗原或抗體固定在固相載體(如酶聯免疫吸附測定板)表面的過程。這一步驟是免疫分析中的關鍵步驟,因為它為後續的免疫反應提供了基礎。
原理:
包被的原理基於抗原抗體反應,通過將抗原或抗體吸附到固相載體上,形成「包被層」。這樣,當加入標記的抗體或抗原時,它們可以與固相上的抗原或抗體發生特異性反應,從而實現信號的放大和識別。
方法:
親和素生物素系統間接包被法:首先用親和素包被載體,然後加入生物素化的DNA。這種方法均勻且牢固,適用於多種抗原物質的定量測定。
對於脂類物質,可以在有機溶劑中溶解後加入ELISA板孔中,通過蒸發使脂質自然乾固在固相表面。
小分子物質需要與大的蛋白載體偶聯後才能固定在固相載體上。
注意事項:
包被原的性質對後續的免疫反應至關重要,因此需要確保抗原的完整性和活性。例如,重組蛋白應在冰浴下緩慢融化以避免降解。
選擇合適的包被液也很重要,一般使用pH9.6的碳酸鹽緩衝液,但根據實驗需要和包被原的特性,也可能採用中性的緩衝溶液。
通過上述方法和技術,包被原理不僅在醫學診斷、藥物研發等領域發揮著重要作用,也為生物分析提供了強大的工具和技術支持。