吉他的音位置是根據其定音原則來確定的，通常定音為E A D G B e（從六弦到一弦，即低音3到高音3），每個品格上的音比同一根弦上前面一個品格高一個半音。
在標準調音（C調）中，從六弦到一弦的空弦音分別是E、A、D、G、B、e，即低音3、低音6、2、5、7、高音3。除了這些空弦音，吉他的指板上每一個品格都對應著一個特定的音，每個品格上的音比同一根弦上前面一個品格高一個半音。例如，六弦上的空弦音E與一弦上的空弦音E是相同的，但它們之間相差了兩個八度。每根弦上的音分別按照十二平均律的順序向更高品處排列，當排列到第十二品的時候，剛好升高了一個八度。
此外，吉他的不同把位對應不同的音符。例如，第一把位從六弦的空弦開始，到一弦的第三品結束，此時四根手指分別控制六弦空弦到一弦第三品的音符。