吸附柱法提取DNA的原理主要基於以下步驟:
樣品處理:首先,樣品(如植物組織或白細胞)經過裂解,以釋放DNA。這一步驟可能包括破壞紅細胞以收集白細胞,並使用表面活性劑使膜蛋白和核蛋白變性,從而游離出DNA。
DNA結合:在特定的緩衝液條件下,DNA與吸附柱中的矽基質發生可逆結合。這通常是在高鹽緩衝系統下實現的。
洗滌和純化:通過改變緩衝液的鹽濃度和pH值,其他雜質被洗脫掉,而目標DNA分子則留在吸附材料上。這一步驟中,變性的蛋白質可能使用蛋白沉澱劑被沉澱,使DNA留在上清液中。
DNA洗脫:在適當的條件下,目標DNA分子從吸附材料表面解離,並通過洗脫步驟被洗脫到洗脫液中,完成DNA的提取。
吸附柱處理:吸附柱在使用後需要進行適當的處理,如加入無水乙醇清洗,以及徹底晾乾吸附材料中殘餘的漂洗液,以確保後續實驗(如酶切、PCR等)的質量。
綜上所述,吸附柱法提取DNA的原理涉及樣品的裂解、DNA與矽基質的可逆結合、洗滌和純化、以及DNA的洗脫,最終得到純化的DNA。