套式PCR(nested PCR)的原理基於聚合酶鏈式反應(PCR)技術,其特點是在PCR反應中加入兩個或多個不同的引物,每個引物針對不同的DNA序列區域。以下是套式PCR的基本步驟:
模板準備:首先需要準備含有目標DNA的模板。
加入引物:在PCR反應中加入兩個或多個引物,這些引物與模板DNA的特定區域互補。
變性-退火-延伸:在DNA聚合酶的催化下,DNA模板在高溫下變性成為單鏈,然後在低溫下引物與單鏈DNA結合,形成復性雙鏈。最後,在DNA聚合酶的最適溫度下,DNA鏈被延伸,從而合成新的DNA鏈。
循環熱循環:套式PCR依賴於熱循環系統,通過反覆的加熱和冷卻,在不同的溫度下進行變性、復性和延伸反應,以實現多輪的DNA擴增。
產物檢測:擴增後的產物可以通過電泳、螢光檢測或其他分子生物學方法進行檢測和鑑定。
套式PCR能夠特異地擴增目標DNA序列,廣泛套用於遺傳疾病的診斷、基因克隆、序列分析等多個領域。