使用手套箱的方法通常包括以下步驟：
開啟手套箱。打開手套箱的門，確保箱內已經充滿新鮮空氣。檢查手套箱內的空氣是否清潔，如果需要，可以更換空氣過濾器。
清潔手套箱內部。使用適當的清潔劑和消毒劑清潔手套箱內部，確保無殘留物。清潔手套箱內部的所有表面，包括門、把手、控制臺等。
穿戴合適的手套。選擇合適尺寸的手套並穿戴。確保手套完全貼合手部，沒有任何破損或漏氣。
開始實驗操作。在手套箱內進行實驗操作時，務必保持手套箱內的清潔和安全。避免在手套箱內進食、喝水或吸菸。
結束實驗後。清潔手套，特別是接觸過實驗材料或設備的部分。脫下手套，並放在指定位置。
關閉手套箱。關閉手套箱的門，確保箱內空氣流通。檢查手套箱是否密封良好，如有需要，請維修或更換密封條。
定期檢查手套箱內部和手套。定期檢查手套箱內部和手套，確保設備完好。如果發現任何問題或故障，請及時進行維修或更換。
此外，手套箱在使用前應檢查氣瓶狀態，確保手套箱工作氣為99.999%的高純氮氣或高純氬氣，並檢查操作人員的手部，手上不可以佩戴戒指、手錶等尖銳物品，指甲需要修剪平整，以防劃傷手套。手套箱在使用過程中，應避免尖銳物品劃破手套和試劑腐蝕手套，隨時關注手套箱的水氧值，一旦發現氧含量超過100ppm，說明手套漏氣，應立刻聯繫手套箱管理人員。手套箱在使用後，應密封好物品，防止粉末、液體等洩露。