虹彩光圈的主要作用包括：
調節瞳孔大小。虹彩光圈中的射極肌通過收縮或擴張來改變瞳孔的大小，以適應不同光線環境。在弱光環境下，瞳孔會變大以增加進入眼內的光線量；在強光環境下，瞳孔會變小以減少進入眼內的光線量，保護視網膜。
控制視網膜受光量。通過調節瞳孔大小，虹彩光圈可以確保進入眼內的光線量保持在適當範圍內，從而保證視網膜受光量的恆定，這是維護視覺健康的重要部分。
美學價值。作為眼睛中帶有色彩的部分，虹彩光圈還具有美學價值，不同顏色的虹彩光圈展現了人類的多樣性美麗。
調節光線的強弱。在顯微鏡等儀器中，虹彩光圈通過改變光圈的大小，約束上行光線的強弱，以適應不同的觀察需求。