雙縮脲法是一種測定蛋白質含量的方法。其原理是雙縮脲在鹼性溶液中可與銅離子產生紫紅色的絡合物,這一反應稱為雙縮脲反應。因為蛋白質中有多個肽鍵,也能與銅離子發生雙縮脲反應,且顏色深淺與蛋白質的含量成正比,而與蛋白質的胺基酸組成及分子量無關,故可用雙縮脲法測定蛋白質的含量。
雙縮脲試劑由氫氧化鈉和硫酸銅組成,用於提供鹼性環境和與蛋白質反應。在操作中,需要先加入氫氧化鈉溶液創造鹼性環境,再加入硫酸銅溶液進行反應。
雙縮脲法的優點是試劑價廉易得、操作簡便、快速,並且不同的蛋白質產生顏色的深淺相近,干擾物質少。然而,其靈敏度較差,不適合微量蛋白的測定,所需樣品量也較大。同時,某些物質如硫酸銨、Tris緩衝液和某些胺基酸等可能會干擾測定結果。
總的來說,雙縮脲法適用於需要快速測定蛋白質含量但不需要十分精確的情況,其測定範圍為1-10mg蛋白質。