中性粒細胞鹼性磷酸酶(NAP)染色的定量分析主要涉及兩種方法:Gomori鈣-鈷法和Kaplow偶氮偶聯法。
Gomori鈣-鈷法:
染色原理:在鹼性條件下,鹼性磷酸酶將基質操作液中的β-甘油磷酸鈉水解,產生磷酸鈉。磷酸鈉與硝酸鈣、硝酸鈷、硫化胺反應,形成不溶性棕黑色沉澱,定位於酶活性所在部位。
特點:該方法較為繁瑣,所需時間較長。
Kaplow偶氮偶聯法:
染色原理:在pH9.6左右的鹼性環境中,成熟中性粒細胞的鹼性磷酸酶能水解基質液中的磷酸萘酚鈉底物,釋放出萘酚。萘酚與重氮鹽偶聯,生成不溶性的有色沉澱,定位於細胞質酶活性所在之處。
特點:是目前常用的方法。不同的底物與重氮鹽的組合不同,以α-醋酸萘酚鈉為例。
染色結果及正常血細胞反應:陽性反應為細胞質中出現不溶性灰黑色到棕黑色顆粒。這些顆粒的數量和強度可以作為評估中性粒細胞活性的一種指標。