CTAB法,即十六烷基三甲基溴化銨法,是一種常用的DNA提取方法,特別適用於植物基因組DNA的提取。CTAB是一種陽離子去污劑,能夠溶解細胞膜,並與核酸形成複合物。在高鹽溶液中,該複合物是可溶的,通過有機溶劑抽提可以去除多糖、酚類以及蛋白質等雜質,最後加入乙醇即可分離出核酸。
CTAB法的實驗流程大致為:植物材料經液氮研磨後,加入預熱的CTAB提取緩衝液進行細胞裂解,然後進行抽提。抽提後的上層溶液中含有核酸,通過加入異丙醇等試劑進行核酸沉澱,再經過離心洗滌和乾燥溶解,最終得到DNA溶液。
CTAB提取緩衝液中的各成分也起著重要作用。例如,Tris-HCl提供一個緩衝環境,防止核酸被破壞;EDTA螯合Mg2+或Mn2+離子,抑制DNase活性,防止DNA被降解;NaCl提供一個高鹽環境,有助於CTAB與蛋白質和中性多糖形成複合物而沉澱;而CTAB本身則起到溶解細胞膜和與核酸結合的作用,方便後續的分離操作。
此外,CTAB法在實際套用中可能需要根據不同的實驗材料和需求進行適當的最佳化和改進,例如調整CTAB的濃度、添加其他試劑等,以提高DNA的提取效率和純度。