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gcamp原理

GCaMP是一種基於綠色螢光蛋白(GFP)的鈣離子指示劑,它通過融合鈣調蛋白(CaM)和平滑肌細胞肌球蛋白輕鏈激酶的片段(M13)來檢測細胞內鈣離子的變化。其基本原理如下:

基本結構:GCaMP由GFP的變體cpEGFP、鈣調蛋白CaM和平滑肌細胞肌球蛋白輕鏈激酶的片段M13融合而成。在沒有鈣離子的情況下,cpEGFP本身不發光。當鈣離子存在時,CaM與M13結合,導致cpEGFP構象變化,從而發出螢光。

工作原理:在沒有鈣離子的情況下,GCaMP不發光。當細胞內鈣離子濃度升高時,CaM與鈣離子結合,進而與M13結合,引起cpEGFP構象變化,導致螢光強度增加。這種螢光強度的變化與細胞內鈣離子濃度的變化成正比,因此可以通過測量螢光強度的變化來反映細胞內鈣離子的動態變化。

套用:GCaMP廣泛套用於神經科學研究中,用於監測神經元活動的鈣信號。通過遺傳編碼的方式,GCaMP可以精確地指示神經元內鈣離子的動態變化,從而研究神經元的活性。GCaMP的不同變體(如GCaMP6s、GCaMP6m、GCaMP6f、jGCaMP7s、jGCaMP7f等)具有不同的動力學特性和敏感性,適用於檢測不同時間尺度的鈣信號。

技術優勢:與傳統的鈣離子染料相比,GCaMP具有更高的信噪比、光穩定性以及更小的光毒性,使得長期監測成為可能。此外,GCaMP可以通過基因編碼的方式引入細胞,提供了一種無創的方式來監測細胞內鈣離子的動態變化。

綜上所述,GCaMP通過其獨特的分子設計和工作原理,為研究細胞內鈣離子濃度變化提供了強大的工具。