液相色譜圖(HPLC)的解讀主要涉及以下幾個方面:
橫座標和縱座標。橫座標表示時間,每個峯對應的時間是該物質(峯)的保留時間;縱座標表示響應強度,即在特定波長下被檢測物質的反應強度(如紫外檢測),響應強度通常用峯高或峯面積表示,峯面積代表物質的量,與物質的量成正比。
峯的識別與定量。在HPLC圖譜中,每個化合物的峯代表其在不同保留時間下的信號強度。峯識別是確定哪些峯代表目標化合物的過程。可以通過與已知標準物質的保留時間進行比較來確認峯代表的目標化合物。
峯形分析和確認峯的特徵。通過觀察峯的對稱性、峯形和峯寬來確定目標化合物的峯。利用多重檢測器(如紫外檢測器和熒光檢測器)進行多通道檢測,可以進一步確定峯的特徵。
定量分析。通常使用標準曲線法進行定量,即通過一系列已知濃度的標準物質構建標準曲線,並根據目標化合物峯面積與標準曲線之間的關係計算樣品中目標化合物的濃度。
基線和色譜參數。基線是檢測器在沒有進樣時信號隨時間的變化曲線,而峯高、峯寬、峯面積、保留時間(tR)、死時間(t0)、相對保留時間、保留因子(k)、分離因子(α)、分配係數(K)和柱效(N)等都是重要的色譜參數,有助於分析化合物的分離特性和相對含量。
綜合以上各點,HPLC圖譜的解讀是一箇綜合分析過程,需要結合峯的形狀、保留時間、響應強度等多方面的信息來進行。