等電聚焦電泳（IEF）是一種電泳技術，其原理如下：
基本原理：使用一種特殊的緩衝液（兩性電解質）在凝膠（通常是聚丙烯醯胺凝膠）內形成pH梯度。在電泳過程中，每種蛋白質會遷移到與其等電點（pI）相等的pH值處，此時蛋白質不再帶有淨正或負電荷，從而形成一個非常窄的區帶。
pH梯度的形成：在IEF中，具有pH梯度的介質從陽極到陰極分布，pH值逐漸增大。
蛋白質的聚焦：由於蛋白質是兩性化合物，其所帶的電荷與介質的pH值有關。帶電的蛋白質在電泳中向極性相反的方向遷移。當蛋白質到達其等電點（此處pH值使得蛋白質不再帶電荷）時，電流達到最小，蛋白質不再移動，從而實現聚焦。
影響因素：為了加快分離和提高解析度，電壓應該儘可能高，但需要避免燒膠。這受到凝膠厚度、電泳冷卻系統、載體兩性電解質的導電性和pH、凝膠介質以及樣品質量和加速劑用量的影響。
綜上所述，IEF通過在凝膠內形成的pH梯度，使蛋白質遷移到其等電點處聚焦，從而實現蛋白質的分離和分析。