放射免疫測定（RIA）的原理主要基於放射性同位素標記的抗原（標記抗原）與非標記抗原（可以是標準抗原或待測抗原）之間與限量的特異性抗體之間的競爭性結合反應。具體步驟如下：
標記與非標記抗原的競爭性結合：
放射性同位素標記的抗原（例如，使用¹²⁵I或³H）與非標記抗原同時與特異性抗體發生競爭性結合。這種競爭性結合是基於抗原-抗體的反應，其中標記抗原和非標記抗原都試圖與抗體上的結合位點結合。
分離與計數：
反應後，通過特定的方法（如沉澱、離心等）將游離的放射性同位素和已結合到抗體上的放射性同位素分離。
使用放射計數器分別測量這兩部分的放射性強度。
計算待測物質濃度：
根據測得的放射性強度，可以計算出待測血清中抗體或抗原的含量。這一計算通常涉及到對標準曲線（已知濃度的標準抗原或抗體與放射性同位素標記的抗原反應後得到的放射性強度曲線）的分析和比較。
RIA是一種非常靈敏的體外測定技術，廣泛套用於生物醫學研究中，用於測量物質濃度，尤其是抗原濃度。它的靈敏度主要得益於放射性同位素的特性，能夠提供高靈敏度的檢測方法。