RNA提取方法多樣,常見的包括:
異硫氰酸胍氯化銫超速離心法。使用異硫氰酸胍和氯化銫,能有效去除RNA酶,適用於多種組織和細胞類型。
鹽酸胍-有機溶劑法。改進自MacDonald 1987年的方法,適用於沒有超速離心及設備的情況下提取細胞總RNA。
氯化鋰-尿素法。利用高濃度尿素和氯化鋰沉澱RNA,適用於大量樣品少量組織細胞的RNA提取。
熱酚法。主要用於少量細胞樣品RNA提取,其產量不高,但簡單易行。
快速提取法。主要用於培養細胞,通過SDS裂解細胞,酚抽提去除蛋白質和DNA沉澱,快速純化RNA。
細胞質RNA提取法。適用於培養細胞,先去除細胞核,然後用蛋白酶K消化蛋白質,RNA提取酚抽提去除蛋白質。
酚-氯化鋰法。通過酚和SDS裂解細胞,變性,解聚蛋白,抑制RNase,並用EDTA保護DNA,後根據RNA和DNA在Li+中的不同沉澱速度分離DNA和RNA。
Trizol法。在勻質化或溶解樣品中,Trizol試劑可保持RNA的完整性,同時能破壞細胞及溶解細胞成分。加入氯仿離心後,裂解液分層成水相和有機相。RNA存在於水相中。
這些方法各有優劣,適用於不同的實驗需求和樣本類型。選擇合適的方法取決於實驗的具體要求和可用資源。