識別並結合一抗
在Western blot實驗中，二抗的作用是識別並結合一抗。一抗是針對特定蛋白質的抗體，它們通過特異性結合目標蛋白質來識別它。二抗則是針對一抗的抗體，通常來自另一種動物（例如兔抗鼠IgG用於檢測鼠源一抗）。二抗上通常連結有顯色基團，如酶或螢光標記，當它與一抗結合後，可以通過底物顯色反應來顯示目標蛋白的位置和表達情況。
二抗的使用可以增加實驗的特異性和靈敏度，因為它能夠減少非特異性結合，從而降低背景著色。此外，二抗稀釋液中添加的抗體保護劑也有助於增加抗體的穩定性，進一步減少非特異性結合。
需要注意的是，二抗不僅能夠識別一抗，還可能識別一抗的重鏈和輕鏈，這有時會導致在電泳中觀察到額外的條帶。為了避免這種情況，可以使用特定的二抗，如Rockland Trueblot®單克隆二抗，它只識別天然二硫鍵的IgG，從而消除由IP抗體變性的重鏈和輕鏈引起的干擾。