Western Blot(也稱為蛋白質免疫印跡)是一種廣泛套用於生物學和醫學研究中的關鍵技術,主要用於蛋白質分析和研究。它的基本原理和步驟包括:
聚丙烯醯胺凝膠電泳(PAGE)。用於分離混合蛋白質樣品,確保每種蛋白質在凝膠中得到單獨的條帶。
蛋白質轉移。通過電泳,將凝膠中的蛋白質轉移到固相支持物(如硝酸纖維素膜或PVDF膜)上,這樣蛋白質就能保持其生物學活性和結構不變。
免疫檢測。將固相支持物上的蛋白質與特異性抗體(一抗)孵育,抗體能夠識別並結合特定的抗原(蛋白質)。
顯色或放射自顯影。加入酶或同位素標記的二抗,與一抗結合後,通過底物顯色或放射自顯影來檢測特定的蛋白質條帶。
Western Blot的主要套用包括:
從細胞或組織中檢測特定的蛋白質。
定量或定性確定目標蛋白質的表達水平。
檢測蛋白質之間的相互作用,如蛋白-蛋白、DNA-蛋白、RNA-蛋白相互作用。
在分子生物學、生物化學、免疫遺傳學等領域中研究基因表達、蛋白質組成和信號通路等生物過程。
此外,Western Blot也在疾病診斷、藥物研發和生物標誌物發現等方面發揮著重要作用。