高效液相層析（High-Performance Liquid Chromatography，簡稱HPLC）是一種基於經典液相層析法並融合了氣相層析理論的新型分離技術。它具備以下特點：
分離能力強：能夠高效地分離極性和非極性化合物，包括小分子和大分子。
測定靈敏度高：適用於分析熱穩定和不穩定化合物。
應用範圍廣：適用於蛋白質、核酸、氨基酸、生物鹼、類固醇和類脂等多種物質的分離和分析。
操作條件靈活：可以在室溫下進行，無需高溫或低溫條件。
HPLC的關鍵技術包括：
高壓輸液泵：提供高達5000psi（約34個標準大氣壓）的壓力，確保流動相能夠高效通過色譜柱。
特殊填充的色譜柱：使用小粒徑的填料，顯著提高柱效，每米塔板數可達幾萬甚至幾十萬。
高靈敏度檢測器：如熒光檢測器、示差折射檢測器和電化學檢測器等，用於連續監測流出物。
HPLC可以根據流動相和固定相的相對極性分爲正相和反相兩種類型。此外，HPLC的固定相可以是具有吸附活性的吸附劑，而流動相則通過特殊處理的硅膠等載體進行輸送。