使用共聚焦皿進行細胞培養的基本步驟如下：
預平衡。首先，在共聚焦培養皿中加入3ml的培養液，然後在培養箱中放置15分鐘。
加細胞。吸去培養液，在底孔中加入500ul含細胞的培養液，然後在培養箱中放置2小時，以便細胞沉降和貼壁。
加培養液。小心地加入2~3ml的不含細胞的培養液，這樣可以為細胞提供足夠的培養液，同時減少由於水分蒸髮帶來的滲透壓變化。
根據實驗的具體要求，步驟2和3可以合併，即在預平衡後直接加入2~3ml含細胞的培養液。在使用共聚焦培養皿進行細胞成像時，應在培養箱內讓細胞培養1~2天後，使用共聚焦顯微鏡進行成像，選擇適當的激發波長、螢光探針和成像參數，根據需要選擇二維或三維成像。