吸光值的計算通常基於朗伯-比爾定律，其標準公式爲吸光度(A)=摩爾吸光係數(ε)×光程長度(l)×溶液濃度(c)。
在特定條件下，如固定波長、溶劑和溫度，摩爾吸光係數(ε)可以視爲常數。光程長度通常以釐米(cm)爲單位，而溶液濃度則以摩爾/升(mol/L)或克/升(g/L)爲單位。根據這些信息，可以計算出吸光度，也稱爲消光係數或光學密度(OD)。
吸光值也可以通過透光率來計算，其公式爲吸光值=−log10(透光率)，其中透光率是入射光與透射光強度的比值。例如，如果透光率爲50%，則吸光值約爲0.301。