吸光度偏大的原因可能包括以下幾點：
樣品配置不當。如果樣品抽取不均勻或混合不充分，或者樣品中的溶解不徹底，存在沉澱或未溶解的物質，都可能導致吸光度偏大。
儀器校準問題。分光光度計在使用前應進行校準，以確保其準確性。如果校準不到位，比如將光源強度或回響設定得過高，可能會導致測量結果偏大。
儀器使用不規範。在分析過程中，使用過期試劑、不規範的操作或儀器不清潔等都可能影響結果的準確性。
樣品濃度過高。如果樣品濃度過高，超出了分光光度計的檢測範圍，也會導致吸光度偏大。
樣品中含有雜質。雜質可能會阻擋測量光路，導致吸光度過高。
光路不乾淨。光路受到污染也會產生錯誤的吸光度結果。
分光光度計本身存在問題。如存在故障或誤差問題。
室溫過高。室溫超過25℃可能導致吸光度偏大。
底物溶液受到污染。如果底物溶液已呈現淡藍色，表明其可能受到污染。
反應時間過長。超過推薦的反應時間也可能導致吸光度偏大。
酶標記物污染其他試劑。使用過的吸頭未立即丟棄或容器未清洗乾淨，可能導致試劑間相互污染。
此外，酸鹼度控制不好（如溶液酸性過強）也可能導致吸光度偏小。解決這些問題的方法包括正確配置樣品、定期校準和檢查儀器、遵循標準操作流程、確保樣品和試劑的質量、保持儀器光路和室內的清潔等。