定量PCR（Quantitative Real-time PCR）的原理是在DNA擴增反應中，通過加入螢光化學物質來測量每次聚合酶鏈式反應（PCR）循環後產物的總量。這種方法利用螢光信號的積累實時監測整個PCR過程，並通過標準曲線對未知模板進行定量分析。定量PCR的準確性基於PCR擴增的指數時期，此時模板的Ct值（循環閾值）與該模板的起始拷貝數存線上性關係，因此可以作為定量的依據。
定量PCR有兩種主要方法：基於探針的化學法和Taqman螢光探針法。基於探針的化學法使用非特異的DNA結合染料或螢光標記的寡核苷酸探針來檢測PCR擴增產物，依賴螢光能量共振傳遞（FRET）來檢測特異性擴增產物。Taqman螢光探針法則是在PCR擴增時加入一個特異性的螢光探針，該探針兩端分別標記報告螢光基團和淬滅螢光基團。在PCR擴增過程中，Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告螢光基團和淬滅螢光基團分離，從而釋放出螢光信號，實時監測PCR反應的進程。
實時螢光定量PCR技術具有高靈敏度、強特異性、高可靠性、良好的重複性和高自動化程度等優點，被廣泛套用於臨床核酸分子診斷。