4:3:1
慢病毒包裝質粒的比例通常遵循特定的配比,以確保病毒顆粒的有效產生。根據提供的信息,三質粒轉染體系中各質粒的比例為4:3:1,具體如下:
PxpAx2: 4份
PMD2g: 3份
PLVX(載有你基因的質粒): 1份
這一比例適用於10cm培養皿中的轉染,其中總質粒的質量為20μg。轉染試劑(如PEI)的量通常是質粒量的2.5-3倍。例如,如果質粒的總質量是20μg,那麼PEI的量應該在50μg到60μg之間。重要的是要注意說的是質量而不是濃度,以避免錯誤。
在實際操作中,確保細胞處於良好的狀態並達到適當的密度(約80%-90%匯合)對於病毒包裝的成功至關重要。轉染後,細胞需要在特定的條件下培養一段時間,以便病毒顆粒的產生達到高峰。通常,在轉染後的48-72小時內收集病毒液。
綜上所述,慢病毒包裝質粒的比例是4:3:1,即PxpAx2、PMD2g和PLVX的比例分別為4份、3份和1份。這一比例是在10cm培養皿中進行轉染時採用的,確保了病毒顆粒的有效產生。