死活染色法是一種用於檢測細胞活死的方法,主要通過染料對活細胞和死細胞的不同親和力來區分它們。這種方法可以分為兩大類:死細胞著色法和活細胞著色法。
死細胞著色法:常用的染料包括台盼藍、苯胺黑、伊紅Y等。這些染料可以穿透變性的細胞膜,與解體的DNA結合,使死細胞著色。活細胞則能阻止染料進入,因此可以通過染色結果來鑑別死細胞與活細胞。
活細胞著色法:常用的染料包括結晶紫、亞甲基藍、甲苯胺藍等。活細胞能吸收這些染料並將其嵌入細胞膜,從而著色。
死活染色法具有操作簡單、價格低廉等優點,但也有一些局限性。例如,台盼藍染色時不宜時間過長,否則部分活細胞也可能著色,影響計數。此外,未經固定的細胞形態可能不清晰。
另一種方法是螢光染色法,它使用螢光染料來檢測細胞活性。例如,碘化丙啶(PI)能穿透正在死亡或已經死亡的細胞膜,使死細胞或凋亡細胞著色。吖啶橙(AO)和溴乙錠(EB)則分別能發出綠色螢光和橘紅色螢光,用於區分不同狀態的細胞。螢光染色法具有靈敏度高、操作簡便、結果容易分辨等特點,並且可以用於細胞凋亡的檢測。不過,這種方法需要特殊的儀器,如螢光顯微鏡、雷射掃描共聚焦顯微鏡或流式細胞儀,並且使用的染料具有一定的毒性,操作時需要採取適當的防護措施。