比耳定律，全稱朗伯-比耳定律，是光吸收的基本定律，適用於所有的電磁輻射和所有的吸光物質，包括氣體、固體、液體、分子、原子和離子。該定律是吸光光度法、比色分析法和光電比色法的定量基礎。比耳定律的數學表達式為A=lg(1/T)=Kbc，其中A為吸光度，T為透射比（透光度），是出射光強度(I)比入射光強度(I0)，K為摩爾吸光係數，與吸收物質的性質及入射光的波長λ有關，c為吸光物質的濃度，單位為mol/L，b為吸收層厚度，單位為cm。
比耳定律的物理意義是當一束平行單色光垂直通過某一均勻非散射的吸光物質時，其吸光度A與吸光物質的濃度c及吸收層厚度b成正比，而與透光度T成反相關。比耳定律的適用條件包括入射光為平行單色光且垂直照射，吸光物質為均勻非散射體系，吸光質點之間無相互作用，輻射與物質之間的作用僅限於光吸收，無螢光和光化學現象發生。適用範圍是吸光度在0.2~0.8之間。
在分光光度分析中，比耳定律是一個有限的定律，其成立條件是待測物為均一的稀溶液、氣體等，無溶質、溶劑及懸濁物引起的散射；入射光為單色平行光。導致偏離朗伯-比耳定律的原因很多，但基本上可分為物理和化學兩個方面。物理方面主要是入射光的單色性不純所造成的；化學方面主要是由於溶液本身化學變化造成的。