粗蛋白的測定通常是通過凱氏定氮法進行的，這種方法通過測定樣品中的氮含量來估算蛋白質含量。粗蛋白的測定原理是基於蛋白質中氮元素的含量大約為16%，因此，將樣品中的氮含量乘以一個轉換係數（通常是6.25）來計算粗蛋白含量。這個係數是通過將100%（蛋白質的真實含量）除以16%（蛋白質中的氮含量）得出的。
然而，需要注意的是，這種方法測定的實際上是含氮化合物總量，包括真蛋白和非蛋白含氮化合物，如游離胺基酸、嘌呤、吡啶、尿素、硝酸鹽和氨等。因此，粗蛋白的測定結果並不完全等同於真蛋白的含量，它只是一個近似值。在寵物食品中，這種測定方法同樣適用，但由於除了真蛋白外，還可能含有天然或人為加入的非蛋白氮物質，所以測得的蛋白質含量只是對真實蛋白質含量的一個估計，因此被稱為「粗蛋白」。