蛋白buffer在生物實驗中扮演著至關重要的角色,其主要作用包括:
指示劑作用:幫助觀察電泳進行的程度。溴酚藍等指示劑顯示電泳的進程,便於檢測上樣有無漏樣。
密度大:通過其成分(如甘油),幫助樣本沉入膠孔底部,確保樣本在電泳過程中能夠均勻分布。
保持蛋白線性及攜帶負電荷狀態:通過添加SDS(十二烷基硫酸鈉),使蛋白質帶上負電荷,確保蛋白質在電泳時能夠一致地向正極移動,從而公平比較不同蛋白質的遷移速度。
促進蛋白質變性:通過還原劑(如巰基乙醇或DTT),打開蛋白質中的二硫鍵,使蛋白質充分變性,有利於WB抗體識別抗原位點。這有助於消除蛋白質的不同空間結構對電泳速度的影響,確保蛋白質的遷移速度僅與其分子量相關。
蛋白buffer中的這些成分共同作用,確保了蛋白質樣品在電泳過程中的正確處理和觀察。