還原糖的定量測定是分析化學中常用的方法,用於評估食品、生物樣品中還原糖的含量。其中,3,5-二硝基水楊酸法是一種常用的還原糖定量測定方法。具體步驟如下:
試劑準備:
3,5-二硝基水楊酸(DNS)試劑:將6.5g DNS溶於少量熱蒸餾水中,加入2mol/L氫氧化鈉溶液325mL,再加入45g丙三醇,搖勻,冷卻後定容至1000mL。
葡萄糖標準溶液:準確稱取乾燥恆重的葡萄糖200mg,加少量蒸餾水溶解後,以蒸餾水定容至100mL,即含葡萄糖為2.0mg/mL。
操作步驟:
在NaOH和丙三醇存在下,3,5-二硝基水楊酸(DNS)與還原糖共熱後被還原生成氨基化合物。在過量的NaOH鹼性溶液中此化合物呈桔紅色,在540nm波長處有最大吸收。
在一定的濃度範圍內,還原糖的量與光吸收值呈線性關係,利用比色法可測定樣品中的含糖量。
結果計算:
利用標準葡萄糖溶液對所用酒石酸銅溶液進行標定,計算出還原糖係數。
再通過公式X=[m1/(m2*V*1000)/250]*100計算出試樣中還原糖的含量。
除了3,5-二硝基水楊酸法,還有其他方法如鹼性銅試劑法、蒽酮比色法、斐林氏法等也可用於還原糖的定量測定。這些方法基於還原糖在特定條件下與試劑反應生成有色化合物,通過比色法或滴定法測定還原糖的含量。