高壓蒸汽滅菌法是一種高效且廣泛的物理滅菌方法，涉及使用高壓和高熱來殺死微生物，包括細菌芽胞。這種方法通常在密閉的高壓蒸汽滅菌器中進行，工作原理是：將滅菌器內的水加熱至沸騰產生蒸汽，並通過排除冷空氣，增加滅菌器內的壓力，從而提高水的沸點，達到比100℃更高的溫度。在103.4kPa（1.05kg/cm²）的壓力下，溫度可升至121.3℃，並維持這個溫度15至20分鐘，這樣可以有效殺死包括芽孢在內的所有微生物。
高壓蒸汽滅菌法適用於耐高溫的物品，如培養基、金屬器械、玻璃器皿、搪瓷、敷料、橡膠以及某些藥物。這種方法的效果取決於多種因素，例如物品的大小和形狀、是否充分暴露於蒸汽中，以及是否排除了冷空氣。為了確保有效滅菌，應注意以下幾點：
物品不應過大，以便蒸汽可以流通到物品的中心部分。
布類物品應放置在金屬類物品上，避免蒸汽遇冷凝結阻礙滅菌效果。
定期檢查滅菌效果，並確保無菌包或容器的乾燥狀態。
此外，進行高壓蒸汽滅菌時，還需要注意操作步驟和安全事項，如正確放置物品、密封容器、排除冷空氣、調整溫度和壓力，以及滅菌後的冷卻和排氣過程。