《鬼泣5》的劇情主要圍繞但丁、尼祿和維吉爾三兄弟的故事展開，以下是其劇情介紹：
魔帝在2000年前打開異界之門，在地球上培育魔界之樹，導致民不聊生。斯巴達，一位勇敢的英雄，為了拯救人類，關閉了異界之門，並與女神官伊娃結婚，生下但丁和尼祿。
但丁，一位半人半魔的存在，與他的兄弟尼祿分別走上了不同的道路。但丁追求力量並遇到許多強大的敵人，而尼祿則與一位神秘女子生了一個兒子。
遊戲的核心部分是但丁、尼祿和他的兒子之間的衝突和合作。其中包括但丁與尼祿的兄弟對決，以及但丁與新的強大敵人蒙德斯的最終決戰。
維吉爾，另一位重要角色，是一位追求無盡力量的惡魔獵人。他的故事與但丁的故事緊密交織，兩兄弟之間的衝突和最終的和解是故事的重要組成部分。
遊戲還深入探討了角色之間的複雜關係，包括但丁與尼祿之間的父子關係，以及他們共同對抗敵人的旅程。