BCA(Bicinchoninic acid)法是一種廣泛套用於蛋白質定量分析的方法,其原理主要涉及兩個化學反應:
在鹼性環境中,蛋白質分子中的肽鍵與硫酸銅中的Cu2+離子發生反應,將Cu2+還原成Cu1+(一價銅離子)。這一過程與Lowry法中的蛋白質定量原理相似,即蛋白質與Cu2+離子絡合併將其還原。
每個生成的Cu1+離子與兩個分子的BCA(二喹啉甲酸)螯合,形成紫色的複合物。這種紫色複合物在562nm波長處有強烈的吸收峰,其吸收值與溶液中蛋白質的濃度成正比。
通過將待測蛋白質樣品的吸收值與標準曲線進行比較,可以計算出樣品中的蛋白質濃度。