CTAB(十六烷基三甲基溴化銨)是一種常用於核酸提取的試劑,其配置方法通常包括以下步驟:
準備基礎緩衝液。基礎緩衝液通常由Tris-HCl(pH 8.0)、EDTA(pH 8.0)、NaCl組成,這些成分共同提供了一個適合核酸提取的環境,防止核酸被破壞,抑制DNase活性,並提供高鹽環境使CTAB充分溶解。
準備CTAB溶液。將CTAB溶解在基礎緩衝液中,通常使用4g CTAB、16.364g NaCl、1M Tris-HCl(20ml)、0.5M EDTA(8ml)的比例。
加入抗氧化劑。為了防止酚類物質氧化成醌,通常會在CTAB溶液中加入Cβ-巰基乙醇,其濃度為0.2%至1%。
準備氯仿-異戊醇混合物。這是在提取過程中用於沉澱DNA的試劑,通常將96ml氯仿與4ml異戊醇混合。
滅菌和冷卻。將配置好的CTAB溶液在65℃水浴鍋中預熱,然後在磨碎的樣品中立即加入提取液,水浴30分鐘後冷卻至室溫。
加入氯仿-異戊醇混合物。將等體積的氯仿-異戊醇混合物加入到冷卻後的樣品中,蓋上蓋子顛倒混勻,確保至少5分鐘的接觸時間。
離心和洗滌。離心10分鐘後,吸取上清液,加入等體積的-20℃預冷的異丙醇,上下顛倒混勻後離心10分鐘,棄液體,留下白色沉澱,用75%酒精和無水乙醇洗滌沉澱物,最後用去離子水溶解DNA。
以上步驟是CTAB提取的基本流程,具體操作可能根據實驗需求和條件有所調整。