DAPI(4',6-二脒基-2-苯基吲哚)染色原理
DAPI是一種常用的螢光染料,能夠與DNA強力結合,具體原理如下:
結合位點。DAPI分子與雙鏈DNA的小溝AT鹼基對位置結合,一個DAPI分子可以占據約三個鹼基對位置。
螢光增強。當DAPI與雙鏈DNA結合時,其螢光強度大約可提高20倍,這使得在螢光顯微鏡下觀察DNA變得容易。
適用範圍。DAPI可以透過完整的細胞膜,因此既可以用於活細胞也可以用於固定細胞的染色。
觀察方法。在螢光顯微鏡下,DAPI染色通常使用紫外光波長的光線進行激發,其最大吸收波長為364nm,最大發射波長為454nm。
與RNA的結合。DAPI也可與RNA結合,但產生的螢光強度只有約為與DNA結合的螢光強度的1/5。
DAPI染色因其高靈敏度、易操作性和低毒性而被廣泛套用於生物學研究,特別是在細胞凋亡檢測和細胞核標記方面。