間接免疫螢光法(Indirect Fluorescence Antibody Test, IFA)是一種用於檢測抗原或抗體存在的方法。其基本原理包括:
固相載體和抗原抗體反應:將抗原或抗體點加在固相載體硝酸纖維素薄膜上,將膜貼於吸水材料上。在膜上依次滴加標本、免疫膠體金及洗滌液等試劑進行抗體或抗原反應,形成大分子膠體金複合物。
親和層析:液體通過微孔濾膜時,滲濾液中的抗原或抗體與膜上的抗體或抗原相接觸,起到親和層析的濃縮作用,達到快速檢測的目的。
洗滌液的徹底洗滌:洗滌液的滲入在短時間內即可達到徹底洗滌的目的,簡化了操作步驟。
螢光標記:在間接免疫螢光法中,用特異性的抗體與切片中的抗原結合後,繼續用間接螢光抗體即螢光二抗 FITC,與前面的抗原抗體複合物結合,形成抗原抗體螢光複合物,在螢光顯微鏡下觀察特異的螢光。
組織培養細胞的套用:在某些情況下,如檢測出血熱,IFA會使用組織培養細胞(如HEp-2細胞)於其上滴加患者血清,再加FITC標記的抗人IgG抗體於抗原片上,形成螢光素標記的抗人Ig複合物,在螢光顯微鏡下觀察不同的螢光模型。
特異性IgG抗體檢測:在出血熱檢測中,IgG抗體是造成免疫損傷的主要成分,其檢測結果有助於判斷疾病分期和預後。檢測抗體並不能判斷患者是否痊癒,應在發病後3~4周再次檢測,以明確有無治癒。
綜上所述,IFA是一種結合了抗原抗體反應、親和層析、螢光標記和特異性抗體檢測等多種技術的免疫學檢測方法,廣泛套用於疾病的診斷和研究。