MLPA（多重連線探針擴增）是一種基於PCR的分子生物學技術，主要用於檢測基因的拷貝數變異和序列變異。該技術的原理涉及以下幾個步驟：
探針設計：MLPA技術使用多個特異性引物對目標DNA序列進行擴增。每個引物序列對應於一個特定的基因區域，並且每個探針包括兩個螢光標記的寡核苷酸片段，一個由化學合成，一個由M13噬菌體衍生法製備。這些探針還包含一段引物序列和一段特異性序列。
雜交與連線：在MLPA反應中，兩個寡核苷酸片段都與靶序列進行雜交，之後使用連線酶連線兩部分探針，形成連線子（ligation probes）。連線子包含一個引物序列和一個標籤序列，標籤序列用於後續的檢測。
PCR擴增：通過熱循環條件使擴增產物被降解，只留下連線子。
檢測：使用引物上的標籤序列進行檢測，可以通過多種方法進行，如螢光標記、放射性標記或質譜分析。
數據分析：最終，通過檢測標籤序列的信號強度，可以確定目標基因區域的拷貝數或序列變異情況。分析軟體對收集的數據進行分析，得出結論。
MLPA技術由荷蘭MRC-Holland公司於2002年首次開發並推出，它能夠同時擴增多個引物序列，每個引物序列對應於一個特定的基因區域，從而實現對基因拷貝數的精確檢測。