Tris-HCl緩衝液的配製方法通常包括以下幾個步驟:
計算所需Tris的質量。常用濃度為0.1M的Tris-HCl緩衝液,這意味著在1升緩衝液中需要12.11克的Tris。
稱量計算好的Tris質量,並將其加入到容量瓶或燒杯中,然後加入適量的蒸餾水或去離子水。使用攪拌棒攪拌直至Tris完全溶解。
調節pH值。使用濃鹽酸(HCl)逐步調節緩衝液的pH值。這個過程需要使用pH試紙或pH計來監測pH值的變化。通常,Tris-HCl緩衝液的pH值範圍在7.4到8.0之間。在調節過程中,應該緩慢加入HCl,以避免pH值過低或過高。
定容。在所有試劑溶解並且pH值調節完成後,將溶液定容至所需的體積(例如1升)。在定容過程中,應繼續保持攪拌,以確保溶液濃度均勻。
檢查pH值。在配置完成後,再次檢查緩衝液的pH值,確保其穩定在所需範圍內。
高壓滅菌和保存。將配製好的緩衝液進行高溫高壓滅菌處理後,可在室溫下保存。如果需要,也可以調整緩衝液的體積和濃度,以適應不同的實驗需求。
請注意,Tris溶液容易吸收空氣中的二氧化碳,因此在使用時應將瓶蓋蓋嚴。此外,由於Tris溶液的pH值會隨著溫度的變化而變化,所以在調整pH值時,應考慮溫度的影響。