三氯乙酸(TCA)是一 種常用的化 學 試 劑,可以通 過 沉澱蛋白 質 來去除 樣品中的蛋白 質。以下是使用三氯乙酸去除蛋白 質的 詳 細步 驟:
沉澱蛋白 質:
將TCA 與去氧 膽酸(DOC)加入蛋白 質 樣品中,使TCA的最 終 濃度 達到20%(w/v)。
混合 後, 將 樣品在冰上放置20至30 分鐘。
然 後,以室 溫 離心15 分鐘,使蛋白 質 沉澱。
去除上清液:
使用巴氏吸管小心移除上清液, 儘量 減少 殘留。
洗 滌蛋白 質 沉澱:
向 沉澱中加入3倍 體 積的丙酮(相 對於原 樣品 體 積),使TCA和DOC溶解 於丙酮中。
再次 離心 後,使用巴氏吸管移除上清液。
沉澱物可在冰上 乾燥10 分鐘,然 後保 存於-20℃。
再溶解蛋白 質:
使用含2- 巰基乙醇的 樣品 緩衝液溶解 沉澱的蛋白 質。
如果 沉澱物中有 殘留的KCl,可能 會形成絮 狀白色 沉澱,但 這通常不影 響 後 續的 電泳分析。
清洗和再溶解:
可以在 離心 後使用冷丙酮或乙醇清洗蛋白 質 顆粒,以去除 殘留的TCA和其他污染物。
洗 滌步 驟可以 重複 幾次以提高蛋白 質 樣品的 質量。
蛋白 質 顆粒可以再溶解在合 適的 緩衝液中 進行 進一步分析。
由於TCA的 強烈 變性作用,一些蛋白 質可能 難以重新溶解,此 時可能需要使用含有 離液 劑、洗 滌 劑或 還原 劑的 緩衝液, 並可能需要 對 顆粒 進行加 熱或 超音波 處理以 便於重新溶解。
通 過上述步 驟,可以有效去除 樣品中的蛋白 質, 為 後 續的生化分析或 實 驗提供 純 淨的 樣品。