分梳作用是梳理過程中的一個基本功能，主要涉及纖維的分離和梳理。具體來說，分梳作用產生於梳理元件的兩個針面之間，其中一個針面握持纖維，另一個針面對纖維進行分梳。這要求兩個針面的針齒傾角相對，即平行配置，並且兩個針面具有相對速度，一個針面對另一個針面的相對運動方向需對著針尖方向。此外，分梳作用還需要較小的隔踞和一定的針齒密度。
在紡紗過程中，分梳作用尤為重要。例如，在羊絨加工中，分梳工藝簡單來說就是分離和梳理，把雜質從羊絨中分離，把羊絨梳理成可以製作成羊絨紗線的單根纖維。在梳棉機中，分梳作用主要由刺輥以及錫林蓋板來完成。刺輥的分梳屬於握持分梳，其作用是使給棉板工作面所託持的棉層形成自上而下逐漸變薄的棉須狀態，然後通過鋸齒對纖維或纖維束的摩擦力大於該纖維或纖維所受的握抖-力時，纖維和纖維束就從棉須中分離出來，並被鋸齒帶走。
此外，主要分梳隔距的「準」以及分梳元件的鋒利度對分梳作用的效率和質量有重要影響。