基因文庫是一種將特定生物的DNA片段轉移到宿主細胞中以形成克隆集合的技術。
基因文庫可以分為基因組文庫和部分基因文庫，如cDNA文庫。在基因組文庫中，生物體的全部基因組DNA被酶切或物理剪下成小片段，這些片段隨後連線到載體DNA上並導入宿主細胞，通過這種方式，每個宿主細胞中包含一個特定的基因組DNA片段。經過繁殖擴增後，這些細胞群體構成了基因文庫。部分基因文庫，如cDNA文庫，首先從生物體中獲得mRNA，然後通過反轉錄酶的作用將其轉換成cDNA，這個過程中，內含子等序列可能被去除，從而得到適用於DNA重組的cDNA片段。
基因文庫的建立對於研究生物體的遺傳信息和特定基因的功能非常重要。它們在分子遺傳學、遺傳工程和生物醫學研究中有著廣泛的套用。