實時螢光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)是一種在DNA擴增反應中，通過螢光化學物質測量每次聚合酶鏈式反應(PCR)循環後產物總量的方法。它能夠在PCR擴增過程中，通過螢光信號對PCR進程進行實時檢測。在PCR擴增的指數時期，模板的Ct值（循環閾值）和該模板的起始拷貝數存線上性關係，這使得實時螢光定量PCR成為定量的依據。
實時螢光定量PCR技術涉及在PCR反應體系中加入螢光基團，利用螢光信號積累實時監測整個PCR進程。最後，通過標準曲線對未知模板進行定量分析。這種方法可以基於探針的化學法，套用帶有螢光的非特異DNA結合染料或螢光標記的寡核苷酸探針來檢測PCR過程中積累的擴增產物。此外，還可以採用螢光標記引物擴增，使螢光標記基團直接摻入PCR擴增產物中。
定量PCR的方法包括外參法、內參法和外標法等。外參法是將樣本與陽性參照在兩個反應容器內反應，而內參法是樣本與陽性參照在一個反應容器內反應。外標法涉及監測擴增效率，而內參法則用於質控監測，排除假陰性結果。
此外，樣品RNA的抽提和RNA質量檢測也是定量PCR實驗中的重要步驟。這包括樣品的溶解、兩相分離、RNA沉澱、RNA清洗、RNA乾燥和RNA溶解等步驟。RNA質量檢測通常採用紫外吸收法測定，通過讀取分光光度計260nm和280nm處的吸收值來測定RNA溶液的濃度和純度。